Indukcja choroby przeszczep przeciwko gospodarzowi jako immunoterapii w nawrotowej przewlekłej białaczce szpikowej czesc 4

Gran oznacza granulocyty, komórki jednojądrzaste MNC i płaszcz BC buffy. Krew od pacjentów 2 i 3 uzyskano przed infuzjami komórek jednojądrzastych, a komórki rozdzielono wirowaniem Ficoll-Hypaque na warstwy komórek jednojądrzastych i granulocytów. Podwielokrotności DNA (10 mikrolitrów) przygotowanego z obu frakcji komórkowych użyto do amplifikacji metodą PCR i analizy wszczepienia 21, 22. DNA pacjenta i DNA dawcy przeszukiwano pod kątem rozróżniania polimorfizmów za pomocą serii starterów PCR flankujących znane regiony polimorficzne22. Startery dla genu parathormonu (PTH) 23 zidentyfikowały polimorfizm w DNA gospodarza, ale nie w DNA dawcy (Figura 2). Po terapii pobierano próbki krwi lub szpiku kostnego w różnym czasie. DNA amplifikowano za pomocą starterów specyficznych dla PTH, a produkty analizowano22. Allel specyficzny dla gospodarza oznaczono ilościowo przez hybrydyzację z oligonukleotydem swoistym dla allelu biorcy, sondę usunięto, a próbkę poddano hybrydyzacji z wewnętrznym oligonukleotydem składającym się z niezmiennej sekwencji PTH.
Wyniki
Odpowiedź na Interferon Alfa-2b
Kontrolę hematologiczną CML uzyskano za pomocą interferonu alfa-2b u 10 z 11 pacjentów. Jednakże żaden pacjent nie miał cytogenetycznej lub molekularnej genetycznej remisji przed infuzją komórek jednojądrzastych dawcy. Po 4 do 10 tygodniach leczenia interferonem alfa-2b, biopsje szpiku wykazały hiperkomórkowość (komórkowość, 80 do> 95 procent), z 74 do 100 procent metafaz zawierających chromosom Ph1 we wszystkich dziewięciu pacjentach, z których moglibyśmy aspirować szpik (osiem pacjenci mieli inne złożone nieprawidłowości kariotypowe). U pozostałych dwóch pacjentów badania cytogenetyczne krwi obwodowej wykazały obecność komórek Ph1-dodatnich. Wykryliśmy transkrypty mRNA bcr / abl w szpiku lub krwi wszystkich dziewięciu pacjentów poddanych ocenie.
Odpowiedź hematologiczna na infuzję interferonu alfa-2b i jednojądrzastych komórek
Rycina 3. Rycina 3. Odpowiedź komórek białych u dwóch pacjentów z CML w nawrocie po wlewach komórek jednojądrzastych dawców. Otwarte kręgi wskazują pozytywne testy dla transkryptów mRNA bcr / abl i negatywne testy kręgów bryłowych. Początek ostrej GVHD wiązał się ze spadkiem liczby białych krwinek i utratą transkryptów mRNA bcr / abl. Leukopenia utrzymywała się u Pacjenta 3, aż do infuzji szpiku kostnego w dniu 181.
Ośmiu pacjentów ze stabilną CML miało pełne odpowiedzi hematologiczne. Po odstawieniu interferonu alfa-2b morfologia krwi pozostała stabilna u tych pacjentów bez konieczności dalszego leczenia interferonem alfa-2b, hydroksymocznikiem lub innymi rodzajami terapii cytoredukcyjnej. Pięciu pacjentów miało przemijające bezwzględne liczby granulocytów poniżej 500 na milimetr sześcienny. U pacjentów, u których wystąpiła odpowiedź, spadek liczby krwinek obwodowych zbiegał się z rozwojem klinicznie jawnej ostrej GVHD (ryc. 3). Ocena szpiku kostnego w ciągu dwóch do ośmiu tygodni po ostatniej infuzji u sześciu pacjentów, u których wystąpiła odpowiedź, wykazała spadek komórkowości do 5 do 30 procent. Jeden pacjent (Pacjent 5) zmarł na infekcję pryszczaka po ostrej GVHD stopnia III i rozwinął się pancytopenia. Aplazja szpiku kostnego rozwinęła się u drugiego pacjenta (Pacjent 3). Ilościowa analiza krwi obwodowej od tego pacjenta bezpośrednio przed pierwszą infuzją komórek jednojądrzastych wykazała resztkową produkcję granulocytów donorowych i komórek jednojądrzastych (Ryc. 2)
[hasła pokrewne: antygen hbs ujemny, ból w lewym podżebrzu, almed myszków ]